多囊肾的分子诊断方法有那些？

多囊肾的分子诊断方法有那些?

多囊肾是遗传性疾病。根据遗传学特点，分为常染色体显性遗传性多囊肾和常染色体隐性遗传性多囊肾两类。常染色体显性遗传性多囊肾常见。ADPKD为常染色体显性遗传，其特点为具有家族聚集性，男女均可发病，两性受累机会相等，连续几代均可出现患者。

1. 基因连锁分析 自1985年首次采用基因连锁分析将PKD1基因定位于第16染色体以来，国内外先后开展了基因连锁分析诊断多囊肾的工作。目前发现的与PKD1基因连锁的微卫星遗传标记有：SM6、SM7、CW2、CW4、AC2.5、KG8、SⅢ6等。新近使用毛细管电泳-基因扫描技术使基因连锁分析更精确、检出率更高。基因连锁分析方法虽简便易行，但缺点是患者家族中至少要有其他两名患者提供DNA样本，父母必须是杂合子。

2. 单链构象多态性分析 单链构象多态性分析(single-stranded conformational polymorphism, SSCP)是指人染色体基因组DNA中的单个核苷酸突变，引起突变前后DNA在变性条件下形成的单链在进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳时，由于碱基三维构象不同，导致迁移速度出现差异的检测方法。多囊肾患者体内存在多个PKD基因突变，利用SSCP分析技术相对简单，可以灵敏地揭示发生在150- 200bpDNA上的点突变，对单个位点变异所致的致病基因突变检出率高。由于PKD致病基因一致性和突变位点不固定性，SSCP检测方法仍有5% ～30%漏检率。

3. 变性高效液相色谱分析　变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography, DHPLC)是利用离子对反向液相色谱技术，通过DNA分离基质，对特定PCR反应产物进行分离。DHPLC能通过温度调节的异源双链分析，自动检测单碱基替换、小片段插入和缺失等基因序列的改变。DHPLC具有灵敏性高、特异性强、省时省力且成本低等优点。采用DHPLC技术检测多囊肾突变检出率高达 95%以上，最大检测片段可达1.5 kb，是近年来较成熟、应用最普遍的多囊肾分子诊断方法。

4. 其他 除以上几种方法外，还有RNAse酶切保护法、荧光素原位杂交(floresence in situ hybridization, FISH)技术等，应用相对较少。